Práctica 6.Glucosa-TR

Determinación cuantitativa de glucosa                          17-10-19

-Objetivo
En esta práctica de glucosa oxidasa vamos a medir la cantidad de glucosa en suero sanguíneo.

-Fundamento
La glucosa oxidasa cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El H2O2 producido se detecta mediante un aceptor cromogenico de oxigeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa

-Materiales y reactivos
--> Gradillas
--> Micropipetas y puntas
--> Contenedor de desechos
--> Tubos de ensayo
--> Tampón --> R1
--> Enzimas--> R2
--> Glucosa CAL

-Procedimiento
1.Preparamos el reactivo de trabajo disolviendo el contenido del R2 en un frasco de R1, lo tapamos y mezclamos de forma suave
2.Realizamos un blanco y un patrón por mesa, depositando en el tubo del blanco 1ml de RT y en el tubo del patrón 1 ml de RT y 10 µl de patrón
3.Preparamos una muestra cada uno, depositando en el tubo de muestra 1 ml de RT y 10 µl de muestra, en este caso de suero sanguíneo, al poco tiempo ya se empezaba a observar el color
4.Tapamos los tubos y los colocamos en el baño termostatico durante 10 min
5.Pasamos a leer la absorbancia en el espectrofotometro
6.Primero ajustamos el blanco
7.Medimos el patrón
8.Medimos la absorbancia de nuestra muestra