Práctica 5. Turbidimetria

Cuantificación de proteínas en orina con ácido sulfosalicilico por turbidimetria   14-10-19

-Objetivo
Aprender la técnica de turbidimetria, que es una variante de la espectrofotometria de dispersión

-Fundamento 
La adición de ácido sulfosalicilico a una solución de proteínas actúa sobre estas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Vamos a cuantificar la concentración de proteínas presentes en una muestra de orina
-Materiales
--> Gradilla
--> 4 tubos
--> Micropipeta 50µl
--> Suero salino fisiologico
--> Proteínas
--> Pipeta de 10 ml
--> Prepipeta
--> Cubeta de espectrofotometria
--> Albumina bovina

-Procedimiento
1.Colocamos los 4 tubos en la gradilla
2.Añadimos 10 ml de SSF a cada tubo
3.Quitamos 50µl al primer tubo (D1)
4.Quitamos 100µl al segundo tubo(D2)
5.Quitamos 200 µl al tercer tubo(D3)
6.Quitamos 400 µl al cuarto tubo(D4)
7.Añadimos a cada tubo la misma cantidad quitada de proteínas

8.Tapamos los tubos y los guardamos
9.Realizamos la dilución del ácido sulfosalicilico, añadiendo 3 gr del ácido a un matraz y completando con agua destilada hasta enrasar 100 ml

10. Dos días después preparamos los dos blancos y cuatro tubos mas de patrón y un ultimo tubo como muestra problema
11. Disponemos en una gradilla los tubos y los rotulamos
-Tubo BR --> 0,5 ml de SSF + 2 ml de ácido sulfosalicilico
-Tubo P1 --> 0,5 ml de D1 + 2ml de ácido sulfosalicilico
-Tubo P2 --> 0,5 ml de D2 + 2 ml de ácido sulfosalicilico
-Tubo P3 --> 0,5 ml de D3 + 2 ml de ácido sulfosalicilico
-Tubo P4 --> 0,5 ml de D4 + 2 ml de ácido sulfosalicilico
-Tubo BM --> 2 ml de SSF + 0,5 ml de orina + 2 ml de la muestra problema

12.Ajustamos a cero con el BR el espectrofotometro
13. Medimos los tubos P1, P2, P3 y P4
14. Ajustamos a 0 de nuevo con el BM
15.Medimos la absorbancia de la muestra problema
-Resultados
-P1 --> 1,605
-P2 --> 1,105
-P3 --> 0,240
-P4 --> 0,072