Práctica 7. Glucosa-HK

Determinación cuantitativa de glucosa.Hexoquinasa                      23-10-19

-Objetivo
En esta práctica vamos a obtener una medida cuantitativa de glucosa utilizando la técnica hexoquinasa

-Fundamento 
La hexoquinasa cataliza la fosforilación de la glucosa por ATP a glucosa-6-fosfato. La glucosa-6-fosfato originada es reducida a 6-fosfogluconato en presencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa con reducción paralela de NAD a NADH+. El aumento en la concentración de NADH en el medio es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada

-Materiales y reactivos
--> Micropipeta y puntas
--> Contenedor de desechos
--> Gradilla
--> Tubos de ensayo
--> Baño termostatico
--> Espectrofotometro
--> Cubetas de espectrofotometria
--> R1 y R2 para formar RT
--> Muestra de orina
--> Glucosa CAL

-Procedimiento
1.Preparamos el RT disolviendo el contenido del R2 en el frasco de R1 como en la práctica anterior
2.Preparamos un blanco y un patrón por mesa, para el blanco depositamos 1 ml de RT en un tubo de ensayo, y para el patrón depositamos 1ml de RT y 10 µl  de glucosa CAL.
3.Colocamos el blanco 5 min en el baño termostatico
4.Pasamos el tiempo ajustamos el blanco en el espectrofotometro
5.Colocamos el patron en el baño durante 5 min
6.Pasado el tiempo realizamos la lectura en el espectrofotometro
7.Realizamos una muestra cada uno, depositando en un tubo 1ml de RT y 10 µl  de orina.
8.Colocamos la muestra en el baño 5 min
9.Pasado ese tiempo medimos su absorbancia en el espectrofotometro

-Cálculos
Absorbancia de la muestra = 0,684
0,684/0,305 x 100 = 222

-Resultados 
222mg/dL de glucosa en la muestra de orina