Práctica 8.Separación de una mezcla de aminoácidos por cromatografía en capa fina

Separación de una mezcla de aa por cromatografia en capa fina                                24-10-19

-Objetivo

En esta práctica vamos a realizar una separación e identificación de los aa triptofano, alanina, valina y arginina presentes en una muestra mediante una cromatografía de capa fina ascendente

-Fundamento

Esta cromatografía es una técnica de separación e identificación de sustancias químicas disueltas en un disolvente (fase móvil) que se mueve sobre una capa delgada de un absorbente idóneo (fase estacionaria).

-Materiales y reactivos 

--> Láminas de gel de celulosa

--> Cubeta o tarro de cristal

--> Micropipeta y puntas

--> Atomizador

-->Butanol

--> Agua

-->Acetona

-->Nihidrina

-Procedimiento

a) Preparación de laminas de gel de celulosa

1.Cogimos unas láminas de gel de celulosa de 5x20 y las cortamos por la mitad, ya que la medida que necesitábamos era de 5x10

2.Marcamos la lámina con un lápiz a 1,5 cm del borde una linea

3.Dibujamos dos círculos sobre esa linea aproximadamente a 1cm de distancia de los bordes

b)Preparación del disolvente

1.Mezclamos 200 ml de butanol mas 50 ml de agua mas 50 ml de acetona y mas 50 ml de ácido acético

2.Colocamos el disolvente en un vaso de precipitado a una altura de 1 cm aproximadamente, un poco antes de llegar a la linea previamente marcada

c)Preparación del patrón y la muestra

1.Depositamos 50 µl de patrón en uno de los círculos previamente dibujados

2.Depositamos entre 2 y 3 µl de muestra en el otro circulo

3.Lo metimos en la estufa unos minutos

4.Lo colocamos en el vaso de precipitado que contiene el disolvente en posición vertical 

5.Esperamos 20 min

d)Preparación de la disolución reveladora

1.Pesamos 0,2gr de nihidrina en la balanza

2.Lo depositamos en una probeta con 100ml de acetona y mezclamos

3.Transcurridos los 20 min marcamos en la lamina hasta donde había ascendido el disolvente con un lápiz

4.Sacamos las láminas a la calle y las pulverizamos con el atomizador

5.Las metimos en la estufa a 110º

-Cálculos y resultados

Rf= distancia recorrida por el compuesto desde el origen/ distancia recorrida por el eluyente desde el origen

Medidas

-Distancia recorrida eluyente--> 3cm

-Distancia recorrida marca 1 --> 1cm

-Distancia recorrida marca 2 --> 2,2 cm

-Distancia recorrida marca 3--> 2,6cm

Rf=1/3= 0,33 --> Arginina

Rf=2,2/3= 0,73--> Ac.Glutaminico

Rf=2,6/3= 0,86--> Felinanalina