Práctica 13. Hemoglobina glicosilada

Hemoglobina glicosilada                                                                              12-12-19

Objetivo
En esta práctica vamos a realizar la determinación de hemoglobina glicosilada por cromatografia en columna
Fundamento
Se basa en mezclar una alícuota de sangre completa con un agente hemolizante, se obtiene la lisis de los hematíes, la liberación de la hemoglobina contenida en ellos y la eliminación de la fracción lábil
Materiales 
--> Tubos de ensayo
--> Eppendorf
--> Gradillas
--> Micropipetas y puntas
Reactivos
--> R1: Biftalato de potasio
--> R2: Tampón 42 mmol/L
--> R3:Tampón 50 mmol/L
--> Columna de cromatografia


Muestra
--> Sangre completa con EDTA
Procedimiento
1.Pipeteamos en un eppendorf 50 µl de sangre y 450 µl de reactivo. Esperamos 10 min
2.Quitamos el tapón superior de la columna y rompemos la espita inferior y retiramos el liquido de la columna
3.Pipeteamos 50 µl del hemolizado en el interior de la columna y esperamos 3 min y descartamos el eventual eluido
4.Pipeteamos 2 ml del reactivo 2 en el interior de la columna y descartamos el eluido
5.Colocamos la columna dentro de un tubo y pipeteamos 2 ml del reactivo 3 y recojemos el eluido
6.Mezclamos el eluido obtenido y leemos su absorbancia en el espectrofotometro
7.Pipeteamos en un tubo 100µl de hemolizado y 12 ml de agua destilada, mezclamos y leemos su absorbancia



Cálculos y resultado
Total --> 1,036
Eluido --> 0,116
0,116/ (3 x 1,036) = 3,73