Práctica 14. Inmunodotting

Inmunodotting                                                                                                   18-12-19

Objetivo
En esta práctica vamos a realizar la técnica de inmunodotting para hepatitis autoinmunes
Fundamento
Se basa en el principio del Enzimoinmunoanalisis. Cada tira del test esta compuesta por una membrana fijada sobre un soporte plastico. En dicha membrana se han dispensado directamente los distintos Ag.
Materiales
--> Bandeja de incubación
--> Papel absorbente
--> Pipetas de 2 ml
--> Micropipetas y puntas
Reactivos
--> Tampón de lavado concentrado
--> Tiras dot
--> Tampón de dilución
--> Conjugado
--> Sustrato
Procedimiento
1.Colocamos una tira en un canal de la bandeja de incubación con los puntos azules hacia arriba
2.Añadimos 2ml de tampón de lavado en cada canal usado
3.Incubamos 10 min en agitación
4.Eliminamos el liquido de los canales invirtiendo lentamente la bandeja y secamos el borde de la bandeja con papel absorbente
5.Añadir 1,5 ml de tampón de dilucion en cada uno de los canales utilizados
6.Añadimos 10 µl de muestra del paciente por canal, incubamos 30 minutos en agitación
7.Eliminamos el liquido de los canales invirtiendo lentamente la bandeja y secamos el borde
8.Lavamos dos veces cada canal utilizado con 1,5 ml de tampon de lavado, agitando durante el lavado. Eliminamos el liquido de los canales invierto la bandeja
9.Añadimos 1,5 ml de conjugado en cada canal e incubamos 30 minutos en agitacion
10.Eliminamos el líquidos de los canales invirtiendo la bandeja
11.Lavamos tres veces con 1,5 ml de tampon de lavado
12.Añadimos 1,5 ml de sustrato e incubamos 10 min
13.Eliminamos el liquido
14.Lavamos una ultima vez con 1,5ml de tampon de lavado
15.Extraemos las tiras de los canales y las dejamos secar en un papel absorbente
16.Colocamos la tira junto a la hoja de interpretación
17.Comparamos el punto correspondiente a cada Ag especifico con el punto de control negativo