Práctica 12. Inmunodifusión radial

Inmunodifusión radial                                                                                          4-12-19

Objetivo
En esta práctica vamos a realizar la cuantificación de una proteína sanguínea por inmunodifusion radial

Fundamento
La inmunodifusion radial es una técnica cuantitativa muy sensible que se utiliza a menudo para detectar los niveles de determinadas proteínas sanguíneas de los pacientes.

Materiales
--> Micropipetas y puntas
--> Placa de petri pequeña
--> 10 cortadores de pocillos
--> Baño termostatico
--> Microondas
--> Probeta
--> Matraz aforado
--> Estufa de incubación
Reactivos 
--> Solución de Ac
--> Solución de Ag estandar
--> Agarosa
--> Tampon en polvo
--> Proteína de concentración desconocida
Procedimiento
1.Preparamos el tampon, vertiendo 200 ml de agua destilada en una probeta y luego vertimos el componente D y mezclamos bien con una varilla
2.Preparamos la agarosa, vertiendo 150 ml de tampon y vertimos el contenido del componente C. Lo metimos en el microondas y cuando ya estaba transparente lo metimos en el baño a 50º
3.Cogimos 26 ml en un recipiente y le añadimos el componente A
4.Preparamos la batería de dilucion. Depositamos 50 µl de tampon en cada tubo, en el tubo 1 depositamos 50µl del tubo E, homogeneizados y pasamos 50 µl al tubo de 2 y asi sucesivamente hasta desechar 50 µl del ultimo tubo
5.Pipeteamos 3000 µl de agarosa en la placa de petri y la dejamos solidificar
6.Realizamos los pocillos en la placa
7.Depositamos 5 µl del Ag en el pocillo central
8.Depositamos 5 µl de cada tubo en el resto de pocillos
9.Tapamos la placa y la colocamos en la cámara húmeda durante 1 semana
Resultados
-Pocillo 1--> 400mm --> Concentración --> 2mg/ml
-Pocillo 2--> 225 mm --> Concentración --> 1 mg/ml
-Pocillo 4--> 64mm --> Concentración --> 0,25 mg/ml
-Pocillo 5 --> 49 mm --> Concentración --> 0,125mg/ml
-Pocillo muestra --> 13 mm


Realizamos el mismo procedimiento solo que con placas comerciales, en las que solo teníamos que aplicar la muestra y esperar unos días para la lectura