Práctica 11. Electroforesis

Electroforesis                                                                                                         27-11-19

Objetivo
-En esta práctica vamos a realizar mediante técnicas electroquímicas la identificación y cuantificación de proteínas.

Fundamento
-Las proteínas que son moléculas anfóteras en medio básico adquieren carga global negativa que hace que migren del cátodo hacia el ánodo cuando son sometidas a un proceso electroforetico. Tras la migración obtenemos 5 fracciones: Albumina, alfa 1-globulinas, alfa 2-globulinas, beta-globulinas y gamma-globulinas

Materiales
--> Alimentador y cubeta de electroforesis
--> Aplicador
--> Laminas de Mylar
--> Papel de filtro
--> Tiras de acetato de celulosa



Reactivos
--> Solución tampon
--> Colorante rojo ponceau
--> Decolorante rojo ponceau
--> Solución transparentadora
--> Solución disolvente


Procedimiento
1.Preparamos el tampon añadiendo 100mg de tris hipurato a 1L de agua
2.Preparación del decolorante, disolviendo ácido cítrico en polvo en 1L de agua destilada, vertimos 500ml en dos cubetas
3.Introdujimos cada grupo una tira en la cubeta con el tampon
4.Movimos la cubeta durante 12 minutos
5.Preparamos la cámara de electroforesis
6.Secamos las tiras colocandolas primero sobre un papel y poniéndole otro encima para quitarle los restos de metanol, despues las colocamos sobre el puente con la cara absorbente hacia arriba y colocamos el puente en la camara de electroforesis
7.Aplicamos la muestra en la tira utilizando un aplicador durante 10 segundos
8.Ajustamos el tiempo y el voltaje (200 V durante 30 min)
9.Tras ese tiempo extraemos las tiras y procedemos la tincion
10.Teñimos la tira con Rojo de Ponceau durante 5 min
11. Pasado ese tiempo, pasamos las tiras a la solución decolorante de ácido cítrico y aplicamos tres baños seguidos
12.Por ultimo pasamos la tira a la solución transparentizadora durante 1 min agitando
13.Colocamos la tira en un Mylar film y eliminamos el exceso de solución tranparentizadora con una varilla de vidrio

Cálculos
(92 x 100)/ 223 = 41,26%

Resultados
Al medir nos dio un valor de 223 que corresponde a la cantidad que hay por debajo de todos los picos
Después nos dio el primer valor (92) el cual corresponde a la albumina