Práctica 21. Bilirrubina directa

Bilirrubina directa                                                                                                   6-2-2020

Objetivo
En esta práctica vamos a aprender a realizar la determinación cuantitativa de la bilirrubina directa
Fundamento
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanilico diazotado midiéndose fotometricamene. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucoronido y bilirrubina libre ligada a la albumina. solo la primera reacciona en medio acuoso precisando la segunda solubilizacion con dimetilsulfoxio para que reaccione. En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada
Materiales
--> Gradilla
--> Tubos de ensayo
--> Micropipetas y puntas
--> Espectrofotometros
Reactivos
--> R1 Ácido sulfanilico
--> R2 Sodio nitrito
Procedimiento 
1. Encendemos el espectrofotometro
2.En el primer tubo depositamos 1,5ml de R1 y 100 µl de muestra
3.En el segundo tubo depositamos 1,5 ml de R1, 50 µl de R2 y 100 µl de suero control
4.En el tercer tubo depositamos 1,5ml de R1, 50 µl de R2 y 100µl muestra
5.Mezclamos e incubamos 5 min exactos
6.Medimos su absorbancia
Cálculos
Muestra --> 0,115
Patrón --> 0,147
Concentración de calibrador --> 0,72
0,115/0,147 x 0,72 = 0,56 mg/dL