Práctica 20. Bilirrubina total

Bilirrubina total                                                                                      6-2-2020

Objetivo
En esta práctica vamos a aprender la realizar la determinación cuantitativa de bilirrubina

Fundamento
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanilico diazotado midiendose fotometricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucuronido y bilirrubina libre liagada a la albumina, solo la primera reacciona en medio acuoso precisando la segunda la solubilización con dimetilsulfoxido para que reaccione. En la determinacion de bilirrubina indirecta se determina tambien la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracion de bilirrubina presente en la muestra ensayada

Materiales
--> Gradilla
--> Tubos
--> Micropipetas y puntas
--> Espectrofotometro
Reactivos
--> R1 Ácido sulfanilico
--> R2 Sodio nitrito
--> Bilirrubin Cal


Procedimiento
1.Encendemos el espectrofotometro
2.En el primer tubo depositamos 1,5 ml de R1 y 100 µl de muestra
3.En el segundo tubo depositamos 1,5 ml de R1, 50 µl de R2 y 100 µl de suero control
4.En el tercer tubo depositamos 1,5ml de R1, 50 µl de R2 y 100 µl de muestra
5. Mezclamos e incubamos 5 min exactos a temperatura ambiente
6.Medimos en el espectrofotometro


Cálculos
Muestra --> 0,286
Patrón --> 0,336
Concentración de calibrador --> 1,17
0,286/ 0,336 x 1,17 = 0,995mg/dL