Práctica 23.Heces

Heces                                                                                                          19-2-2020

Objetivo 
En esta práctica vamos a aprender a realizar la observación macroscopica y microscópica de heces
Fundamento
En las heces podemos observar con facilidad el grado de digestión de los distintos principios inmediatos, de modo que este examen microscópico es de gran ayuda en el diagnostico de los distintos tipos de patologías relacionadas con el proceso de la digestión
Material
--> Vaso de plastico esteril
--> Espatula
--> Microscopio
--> Portas
--> Mechero
--> Cubre

Reactivos
--> Lugol
--> Sudan III
--> Agua destilada
Procedimiento
1.Preparamos el lugol con una dilucion del 1/3 con 5 ml de lugol y 10 ml de agua destilada
2.Lo mezclamos en un matraz erlemenyer
3.Preparamos el Sudan III, mezclando 0,5 g de Sudan III con 45 ml de etanol 96º, luego lo calentamos en el microondas, los dejamos enfriar y lo filtramos
4.En un tubo de centrifuga depositamos 10 ml de agua destilada y una pequeña cantidad de heces y mezclamos
5.Repartimos la mezcla en dos tubos, uno con almidon y otro con aceite
6.Depositamos una gota de cada tubo en portas diferentes
7. En el porta con la muestra de heces y almidon depositamos 2 gotas de lugol
8.En el porta con la muestra de heces y aceite echamos dos gotas de Sudan III y calentamos el porta con el mechero
9.Observamos al microscopio

Práctica 24. Sangre en heces

Sangre en heces                                                                                              20-2-2020

Objetivo
En esta práctica vamos a aprender a realizar la determinación de sangre oculta en heces por inmunocromatografia
Fundamento 
Por medio de inmunocromatografia vamos a utilizar una muestra de heces y por medio de un Ac anti Hb incluido en la placa podremos saber si existe sangre oculta en heces para un correcto diagnostico
Material
--> Tubo colector con 2ml de 0,1 M de PBS
--> Test Nadal
--> Pipetas pasteur
--> Cronometro
--> Placas de petri


Procedimiento 
1.Adulteramos la muestra de heces con sangre, depositando unas gotas de sangre capilar e un placa de petri y depositando heces
2.Cogimos el tubo colector horizontalmente y abrimos el tapón azul, luego extrajimos el aplicador de muestra de color azul
3.Lo introdujimos en tres puntos distintos de las heces y lo volvimos a reinsertar en el tubo y cerramos el tapón
4.Sacamos el test del envoltorio y agitamos el tubo
5.Rompemos la punta del tubo y depositamos unas gotas en el orificio de la tarjeta
6.Esperamos 5 min y observamos 5 min

Práctica 22. Sedimento urinario

Sedimento urinario                                                                                        13-2-2020

Objetivo
En esta práctica se pretende analizar  la orina macroscopicamente y microscopicamente para observar el sedimento urinario al microscopio
Fundamento 
Búsqueda de distintos elementos formes como leucocitos, cilindros, etc con diferente utilidad diagnostica
Material
-->Gradilla
--> Recipiente de boca ancha estéril
--> Tubos de centrifuga
--> Pipetas pasteur
--> Centrifuga
--> Microscopio
--> Tiras reactivas


Procedimiento
1.Observamos macroscopicamente la orina, anotando su turbidez, aspecto, color y pH mediante tiras reactivas

2.Tomamos muestras de orina y las colocamos en tubos de centrifuga, se centrifugaron a 2000 rpm durante 10 min
3.Eliminamos le sobrenadante con una pipeta pasteur
4.Resuspendimos el sedimento y depositamos unas gotas sobre una placa
5.Observamos al microscopio


Resultados
1--> Muy turbia, con color, pH 5
2--> Turbia, colurica, pH 5
3--> Turbia, color normal, pH 5
4--> Turbia, color normal, pH 5,5
5--> Turbia, con sedimento, pH 7
6--> No muy turbia, color normal, pH 6

Práctica 21. Bilirrubina directa

Bilirrubina directa                                                                                                   6-2-2020

Objetivo
En esta práctica vamos a aprender a realizar la determinación cuantitativa de la bilirrubina directa
Fundamento
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanilico diazotado midiéndose fotometricamene. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucoronido y bilirrubina libre ligada a la albumina. solo la primera reacciona en medio acuoso precisando la segunda solubilizacion con dimetilsulfoxio para que reaccione. En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada
Materiales
--> Gradilla
--> Tubos de ensayo
--> Micropipetas y puntas
--> Espectrofotometros
Reactivos
--> R1 Ácido sulfanilico
--> R2 Sodio nitrito
Procedimiento 
1. Encendemos el espectrofotometro
2.En el primer tubo depositamos 1,5ml de R1 y 100 µl de muestra
3.En el segundo tubo depositamos 1,5 ml de R1, 50 µl de R2 y 100 µl de suero control
4.En el tercer tubo depositamos 1,5ml de R1, 50 µl de R2 y 100µl muestra
5.Mezclamos e incubamos 5 min exactos
6.Medimos su absorbancia
Cálculos
Muestra --> 0,115
Patrón --> 0,147
Concentración de calibrador --> 0,72
0,115/0,147 x 0,72 = 0,56 mg/dL

Práctica 20. Bilirrubina total

Bilirrubina total                                                                                      6-2-2020

Objetivo
En esta práctica vamos a aprender la realizar la determinación cuantitativa de bilirrubina

Fundamento
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanilico diazotado midiendose fotometricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucuronido y bilirrubina libre liagada a la albumina, solo la primera reacciona en medio acuoso precisando la segunda la solubilización con dimetilsulfoxido para que reaccione. En la determinacion de bilirrubina indirecta se determina tambien la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracion de bilirrubina presente en la muestra ensayada

Materiales
--> Gradilla
--> Tubos
--> Micropipetas y puntas
--> Espectrofotometro
Reactivos
--> R1 Ácido sulfanilico
--> R2 Sodio nitrito
--> Bilirrubin Cal


Procedimiento
1.Encendemos el espectrofotometro
2.En el primer tubo depositamos 1,5 ml de R1 y 100 µl de muestra
3.En el segundo tubo depositamos 1,5 ml de R1, 50 µl de R2 y 100 µl de suero control
4.En el tercer tubo depositamos 1,5ml de R1, 50 µl de R2 y 100 µl de muestra
5. Mezclamos e incubamos 5 min exactos a temperatura ambiente
6.Medimos en el espectrofotometro


Cálculos
Muestra --> 0,286
Patrón --> 0,336
Concentración de calibrador --> 1,17
0,286/ 0,336 x 1,17 = 0,995mg/dL

Práctica 19. Creatinina

Determinación cuantitativa de Creatinina                                                      30-1-20
Objetivo
En esta práctica vamos a aprender a realizar la determinación cuantitativa de creatinina.
Fundamento
El ensayo de la creatinina está basado en la reacción de la creatinina con el picrato de sodio descrito por Jaffe. La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra ensayada.
Materiales
--> Micropipetas y puntas
--> Tubos
--> Gradilla
--> Cubetas
--> Espectrofotómetro
Reactivos
--> R1 Reactivo pícrico
--> R2 Reactivo alcalinizante
--> Creatinine cal


Procedimiento
1.Encendemos el espectrofotómetro
2.Preparamos el reactivo de trabajo, mezclando volúmenes iguales de R1 y R2
3.En el tubo del blanco, depositamos 1 ml de RT
4.En el tubo del patrón, depositamos 1 ml de RT y 100 µl de patrón
5.En el tubo de muestra, depositamos 1 ml de RT y 100 µl de muestra
6.Mezclamos y pusimos en marcha el cronómetro
7.Medimos la absorbancia a los 30 segundos y después a los 90 segundos


Resultados
0,007/0,003 x 2 = 4,6

Práctica 18. HDL colesterol

Determinación cuantitativa de HDL colesterol                                                           29-1-20
Objetivo
En esta práctica vamos a aprender a realizar la determinación cuantitativa del colesterol HDL
Fundamento
Las partículas de HDL son lipoproteinas de alta densidad que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado. Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hígado para su excreción, se les conoce como el colesterol bueno.
Materiales 
-->  Micropipetas y puntas
-->  Cubetas
-->  Tubos
-->  Espectrofotómetro
-->  Gradilla
Reactivos
-->  R1
-->  R2
-->  HDL cal



Procedimiento
1.Encendemos el espectrofotómetro
2.En el tubo del blanco depositamos 300 µl de R1
3.En el tubo del patrón depositamos 300 µl de R1 y 3 µl de calibrador
4.En el tubo de muestra depositamos 300 µl de R1 y 3 µl de muestra
5.Mezclamos e incubamos 5 minutos a 37º
6.Leemos la absorbancia
7.Después de medir, añadimos 100 µl de R2 a cada uno de los 3 tubos
8.Mezclamos e incubamos 5 minutos a 37º y medimos la absorbancia
  

Resultados
No obtuvimos resultados coherentes ya que la cantidad presente en el tubo era insuficiente para ser leída en la cubeta